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      離心機(jī)分離實(shí)例一

      2009-05-18 [1750]

          豬腎中微粒體膜組分粗品的分離

            儀器與試劑

            1.超速離心機(jī)(冷凍離心機(jī))和轉(zhuǎn)頭

            2.勻漿緩沖液。50m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4),0.33mol/L蔗糖。

             3.重懸緩沖液。10m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4)。

            方法

             1.使用韋林?jǐn)嚢杵鳎ㄒ?℃預(yù)冷)在10倍體積(1L)的勻漿緩沖液(要求4℃預(yù)冷),中破碎100g豬腎皮質(zhì)。

              2.將勻漿物在離心機(jī)中于8000×g離心15min;

               3.小心地轉(zhuǎn)移出上清液,并將其在26000×g離心2min;

                4.用重懸緩沖液(要求4℃預(yù)冷)重懸離心得到的微體沉淀至蛋白質(zhì)終濃度約為10mg/ml。這樣得到的微粒體沉淀重懸物就是膜結(jié)合蛋白質(zhì)的來(lái)源

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