无码小说,欧美色图亚洲色图小说,69影院人妻系列,人妻91不卡在线

    <span id="tgj3u"><nav id="tgj3u"></nav></span>
    <i id="tgj3u"><meter id="tgj3u"></meter></i>
    <li id="tgj3u"><big id="tgj3u"></big></li>
    1. <rt id="tgj3u"><small id="tgj3u"></small></rt>
    2. <span id="tgj3u"></span>

      <label id="tgj3u"><legend id="tgj3u"></legend></label>
      首頁 > 技術(shù)文章 > 出口禽肉中桿菌肽殘留量檢驗方法

      出口禽肉中桿菌肽殘留量檢驗方法

      2008-12-31 [2356]

      中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準 中華人民共和國進出口商品檢驗行業(yè)標準

           出口禽肉中桿菌肽殘留量檢驗方法
                杯 碟 法 SN 0295?93
      Method for the determination of bacitracin
      residues in poultry meat for export
      ?Cylinder-plate method
      ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
      1 主題內(nèi)容與適用范圍
        本標準規(guī)定了出口禽肉中桿菌肽殘留量的抽樣、制樣和杯碟測定法。
        本標準適用于出口凍雞中桿菌肽殘留量的檢驗。
      2 引用標準
        SN 0179 出口食品中四環(huán)素族抗生素殘留量檢驗方法
      3 抽樣和制樣
      3.1 檢驗批
        以不超過2500件商品為一檢驗批。
        同一檢驗批的商品應(yīng)具有相同特征,如包裝、標記、產(chǎn)地、規(guī)格和等級等。
      3.2 抽樣數(shù)量
             批量,件            zui低抽樣數(shù),件
              1~25               1
             26~100               5
             101~250              10
             251~500              15
             501~1000              17
            1001~2500              20
      3.3 抽樣方法
        按3.2規(guī)定的抽樣件數(shù)隨機抽取,逐件開啟,每件至少取一袋作為原始樣品,原始樣
      品總量不少于2kg,放入清潔容器內(nèi),加封后,標明標記,及時送交實驗室。
      3.4 樣品制備
        從每袋原始樣品中取出部分有代表性樣品,將可食部分放入絞碎機中絞碎均勻,充分
      混勻、用四分法縮分不少于1kg試樣,裝入清潔容器內(nèi),加封后,標明標記。
      3.5 樣品保存
        將試樣于?18℃冷凍保存。
        注:在抽樣及制樣過程中,必須防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
      4 測定方法
      4.1 方法提要
        用33%吡啶溶液提取試樣中桿菌肽,將提取液再用甲醇提取,經(jīng)減壓濃縮至干,用磷
      酸鹽緩沖液溶解殘留物,調(diào)整pH后用杯碟法測定。
      4.2 設(shè)備和材料
      4.2.1 培養(yǎng)皿:內(nèi)徑90mm,底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿,并應(yīng)配有陶瓦蓋。
      4.2.2 牛津杯:外徑7.8±0.1mm,內(nèi)徑6.0±0.1mm,高10±0.1mm,不銹鋼管。
      4.2.3 游標卡尺:測量范圍0~200mm,精度0.02mm,或使用抑菌圈測量儀測量。
      4.2.4 離心機:轉(zhuǎn)速3000r/min。
      4.2.5 旋轉(zhuǎn)式真空濃縮器。
      4.2.6 恒溫培養(yǎng)箱:36±1℃。
      4.2.7 高壓滅菌器。
      4.2.8 其他:玻璃板,吸管,滴管,茄形瓶等。
      4.3 試劑和培養(yǎng)基
      4.3.1 試劑
      4.3.1.1 吡啶: 分析純。
      4.3.1.2 吡啶溶液:33%。取吡啶33mL,用蒸餾水定容至100mL。
      4.3.1.3 甲醇:分析純。
      4.3.1.4 磷酸鹽緩沖液:5%, pH6.5。稱取22.15g無水磷酸氫二鉀和27.85g無水磷酸
      二氫鉀溶解于蒸餾水中,定容至1000mL。
      4.3.1.5 氫氧化鈉溶液:1mol/L。
      4.3.1.6 磷酸鹽緩沖液:1%, pH6.0。稱取2.0g無水磷酸氫二鉀和8.0g無水磷酸二氫
      鉀溶解于蒸餾水中,定容至1000 mL。
      4.3.1.7 桿菌肽標準品:58 IU/mg(衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所提供)。
      4.3.1.8 試驗菌種:藤黃微球菌(Micrococcus Luteus), 菌種號28008(衛(wèi)生部藥品生
      物制品檢定所提供)。
      4.3.2 培養(yǎng)基
      4.3.2.1 增菌用培養(yǎng)基: 見附錄A第A1章。
      4.3.2.2 基層用培養(yǎng)基: 見附錄A第A2章。
      4.3.2.3 菌種層用培養(yǎng)基: 見附錄A第A3章。
      4.4 測定步驟
      4.4.1 工作液制備
      4.4.1.1 桿菌肽標準貯備液
        準確稱取適量的桿菌肽標準品,用1%pH6.0磷酸鹽緩沖液配制成100 IU/mL的標準
      貯備液,于冰箱中保存,可使用一周。
      4.4.1.2 桿菌肽標準工作液
        吸取一定量桿菌肽標準貯備液,用1%pH6.0磷酸鹽緩沖液稀釋成0.15和0.6 IU/mL
      的工作標準液,以及0.025,0.050,0.100,0.200,0.400,0.800 IU/mL的稀釋液,作為制
      備標準曲線的標準濃度溶液,0.100 IU/mL的稀釋液為參考濃度溶液。以上稀釋液均須
      當日配制。
      4.4.1.3 菌種培養(yǎng)及菌液的制備
        將試驗菌種安瓿瓶上部消毒后敲碎,加入少量增菌用培養(yǎng)基(4.3.2.1)溶解后,移入
      以上培養(yǎng)基中,混勻后于36±1℃培養(yǎng)24h,再轉(zhuǎn)接至瓊脂試管斜面(4.3.2.3), 培養(yǎng)16~
      18h,然后加入適量生理鹽水,將菌苔洗下,備用。
      4.4.2 試液制備:準確稱取經(jīng)絞碎混勻的試樣10.0g于均質(zhì)器內(nèi),加入17mL吡啶溶液(33%),
      均質(zhì)3min后,移入離心管中離心20 min(3000 r/min)。取上清液10mL,置于另一個離心管
      內(nèi),加入30 mL甲醇充分振搖2min,再離心 20min(3000 r/min)。將上清液移入茄形瓶中,
      減壓濃縮至干,加入3mL磷酸鹽緩沖液(5%)溶解即為樣液。此樣液中相當于禽肉試樣濃度
      為1.96g/mL。
      4.4.3 測定
      4.4.3.1 平板制備
        于無菌平皿中加入 20mL熔化的基層用培養(yǎng)基(4.3.2.2),保持水平,待其凝固備用。
      然后,將錐形瓶中菌種層用培基(4.3.2.3)經(jīng)熔化并冷卻至50~55℃,加入適量的試驗菌
      液(4.4.1.3)使之充分混合后,取4mL注入上述基層培養(yǎng)基上,保持水平,待其凝固。在測
      定前應(yīng)先用0.15 IU/mL標準工作液對該菌液濃度的平板進行預(yù)測試,經(jīng)培養(yǎng)后其標準工作
      液所呈現(xiàn)的抑菌圈直徑在10mm以上,則該菌液濃度的平板即可使用,否則須調(diào)整其菌液濃
      度,制成合于檢定用的平板。
      4.4.3.2 標準曲線的制備
        可參照SN 0179?92中的6.1。
      4.4.3.3 檢測
        每個樣品用三個檢定平板,在每個平板上,如不需定量時,置4 只消毒的牛津杯,對
      角2只注滿樣液,剩余的2只杯里分別注滿0.6IU/mL和0.15 IU/mL杯菌肽標準工作液;如需
      定量時,須置6只消毒的牛津杯,間隔注滿樣液和0.1 IU/mL桿菌肽標準工作液,于36±1℃
      培養(yǎng)17±1 h。
      4.5 結(jié)果計算和表述
      4.5.1 結(jié)果計算和表述
        在三個檢定平板上,如樣液呈出與0.6IU/mL和0.15IU/mL標準工作液相同的清晰抑
      菌圈時,可用游標卡尺或測量儀進行測量,其抑菌圈平均直徑在10 mm以上者為陽性。
        對于需定量的實驗結(jié)果,將分別算出三個檢定平板上0.1 IU/mL和樣液的抑菌圈直徑
      的平均值,經(jīng)校正后,于標準曲線上查出其抑菌圈直徑的平均值所對應(yīng)的標準濃度值,通
      過式(1)計算可得出樣品中抗生素的含量:
      c
      X=── ......................(1)
      m
      式中:X??樣品中桿菌肽的含量,IU/g;
         c??從標準曲線上查出樣液所對應(yīng)的抗生素濃度,IU/mL;
         m??zui終試液所代表的禽肉試樣的濃度,g/mL。
      4.5.2 結(jié)果換算
        如果樣品中桿菌肽含量的單位要采用mg/kg表示時,可將IU/g按照下述方法進行換算:
      標準品中桿菌肽含量=A IU/mg
        樣品中桿菌肽含量=B IU/g
      1 IU=1/A mg=1/A×10**3μg .............................(2)

      B IU/g=B/A×10**3μg/g=B/A×10**3mg/kg .................(3)

      式中:A??標準品中桿菌肽含量的數(shù)值;
         B??依據(jù)式(1)計算所得到的樣品中桿菌肽的數(shù)值。
      5 測定低限、回收率
      5.1 測定低限
        本方法測定低限為0.025 IU/g。
      5.2 回收率
       回收率的數(shù)據(jù):桿菌肽添加濃度在0.025~0.100IU/g范圍內(nèi),回收率為74.8%~108.8%。

      ━━━━━━━━━━━

      附 錄 A 
                    培養(yǎng)基成分及制備方法
                       (補充件)
      A1 增菌用培養(yǎng)基
          蛋白胨 10.0g
          牛肉浸膏        5.0g
          氯化鈉         2.5g
          蒸餾水 1000mL
        將上述各成分于蒸餾水中加熱溶解,用1 mol/L氫氧化鈉溶液或10%鹽酸調(diào)節(jié)pH,使
      其滅菌后pH為7.0±0.1, 分裝于小試管中,每管約3mL,于121℃15min高壓滅菌。
      A2 基層用培養(yǎng)基
          蛋白胨         6.0g
          牛肉浸膏         1.5g
          酵母浸膏        3.0g
          瓊脂 15.0g
          蒸餾水 1000mL
        將上述各成分于蒸餾水中加熱溶解,用1mol/L氫氧化鈉溶液或10%鹽酸調(diào)節(jié)pH,使其
      滅菌后pH為6.5±0.1,分裝于錐形瓶內(nèi),于121℃15 min高壓滅菌,備用。
      A3 菌種層用培養(yǎng)基
          蛋白胨         6.0g
          牛肉浸膏        1.5g
          酵母浸膏        3.0g
          葡萄糖         1.0g
          胰酪蛋白        4.0g
          瓊脂 15.0g
          蒸餾水 1000mL
        將上述各成分于蒸餾水中加熱溶解,用1mol/L氫氧化鈉溶液或10%鹽酸調(diào)節(jié)pH,使其
      滅菌后pH為6.5±0.1,分裝于錐形瓶和大試管內(nèi),于121℃15min高壓滅菌。滅菌后將試管
      制備成所需斜面?zhèn)溆谩?br />附 錄 B
      檢驗程序圖
      (補充件)
      試樣(10.0g)           標準貯備液           試驗菌培養(yǎng)
      ┃               ┃               ┃
      ┃ 于均質(zhì)杯內(nèi)加入 ┃ ┃
      ┃ 17 mL33%吡啶 ┃ ┃
      ┃ ┃ ┃
      均質(zhì)3min ┃ ┃
      ┃ 移入離心管 ┃ ┃
      ┃ ┃ ┃
      離心20min(3000r/min) 標準工作液           菌液制備
      ┃               ┃ ┃
      取上清液(10mL) ┃ ┃
      ┃ ┃ ┃
      ┃ 加入30mL甲醇 ┣━━━━━━━━━━━━檢定用平板制備
      ┃ ┃               ┃
      振搖2min ┃ ┃
      ┃ ┃ ┃
      離心20min 制備標準曲線 ┃
      ┃ ┃
      取上清液入茄形瓶 ┃
      ┃ ┃
      蒸 干 ┃
      ┃ 加入3 mL 5% ┃
      ┃ 磷酸鹽緩沖液 ┃
      ┃ ┃
      樣液(pH6.5) ┃
      ┃ ┃
      ┗━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━┛

      檢 測
                        ┃
      結(jié)果計算和表述

      ━━━━━━━━━━━
      附加說明:
      本標準由中華人民共和國國家進出口商品檢驗局提出。
      本標準由中華人民共和國天津進出口商品檢驗局負責起草。
      本標準主要起草人袁而森、王素琴、李劍影。
      本標準等同采用日本厚生省檢驗方法,畜水產(chǎn)食品中の殘留物質(zhì)檢查法(1990)。
      ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
      中華人民共和國國家進出口商品檢驗局1993-12-28批準 1994-05-01實施
       

      掃一掃,關(guān)注微信
      地址:湖南長沙市望城經(jīng)濟開發(fā)區(qū)金穗路35號湘儀工業(yè)園 傳真:0731-82842829
      ©2025 湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號:湘ICP備20004928號-5